Clonacion y caracterizacion de un gen de invertasa de pichia anomala y estudio de su expresion en saccharomyces cerevisiae

Abstract

El presente trabajo describe el clonaje del gen INV1 de Pichia anomala que codifica para una proteína con actividad invertasa, así como el estudio y caracterización de la expresión de este gen en la levadura Saccharomyces cerevisiae. El gen INV1 clonado presenta una fase de lectura abierta de 1650 pb que codifica para una proteína de 550 aa con gran homología a nivel de secuencia de aminoácidos con proteínas con actividad invertasas caracterizadas en otra levaduras. Esta secuencia va precedida por una región 5' que presenta los elementos consensos mínimos para promover la transcripción del gen. Cuando este gen es introducido en un mutante de S. cerevisiae carente de actividad invertasa mediante un vector adecuado, se puede detectar el producto del gen INV1 en dos formas de diferente peso molecular aparente. Este trabajo demuestra que esa diferencia de masa corresponde a un distinto grado de glicosilación y que presentan una localización celular diferente: una interna y otra externa a la célula. En ambos casos puede detectarse actividad invertasa, por lo que se concluye que la forma citosólica representa la proteína en tránsito antes de ser secretada por la célula.