Estudio de la proteina 53bp1 implicada en la señalizacion del daño al adn y su relacion con apoptosis

Abstract

Distintos tipos de daño al ADN puede ser generados y en función de dónde sean originados o del factor que los produzca, estos pueden ser divididos en endógenos, causados por el propio metabolismo celular o exógenos, producidos por reactivos químicos o radiación. Para evitar que los distintos daños al ADN tengan un efecto permanente en la célula, ésta responde a ellos con un mecanismo global conservado a lo largo de la evolución denominado DDR (DNA Damage Response). La DDR tiene lugar a través de una cascada de señalización de proteínas e incluye mecanismos que retrasan la progresión del ciclo celular (checkpoint) y que activan vías de reparación del daño. Por otra parte, la no reparación del daño producido en el ADN, puede activar vías de muerte celular programada o apoptosis. 53BP1 es una proteína nuclear implicada en la señalización del daño al ADN que inicialmente se identificó por el método de dos híbridos de levadura como una proteína de unión a la proteína supresora tumoral p53, (p53-Binding Protein 1). En presencia de daño, 53BP1 colocaliza en los sitios de daño con proteínas involucradas en la DDR, formando focos nucleares discretos que también se detectan, en respuesta a otros agentes genotóxicos como radiación UV, hidroxiurea (HU), camptotecina, y etopósido. 53BP1 esta involucrada en la DDR a través de la parada de ciclo celular en respuesta a daño en el ADN y en la reparación de los mismos por NHEJ. El objetivo de esta tesis fue estudiar la conexión entre 53BP1 y la apoptosis, estudiando si 53BP1 sufre modificaciones durante el proceso apoptótico mediado por las vías intrínseca y extrínseca y si estas modificaciones son dependientes de caspasas. Mediante análisis por Western Blot determinamos que 53BP1 es sustrato de caspasas en las líneas tumorales HeLa, A549, HL60 y que las modificaciones sufridas son dependientes de caspasas y generadas tanto por la vias intrínseca como por la via extrínseca de la apoptosis. Por otro lado, el estudio de la función biológica de los fragmentos generados durante el procesamiento de 53BP1 por caspasas no parecen estar involucrados en la activación de la apoptosis. La proteólisis en el extremo carboxilo-terminal de 53BP1 se produce dentro del dominio de unión al ADN impidiendo que 53BP1reconozca y señalice los daños producidos en el ADN, inactivandeo, de esta manera la función de 53BP1 en la DDR. Por otra parte, 53BP1 es requerida para la inducción de apoptosis en MEFs, fundamentalmente en la inducción por la vía extrínseca y en menor medida la intrínseca.