Mecanismos moleculares implicados en la infección por el vih-1identificación de nuevos factores celulares controladores de la infección

  1. Marrero Hernández, Sara
Dirixida por:
  1. Agustin Valenzuela Fernandez Director

Universidade de defensa: Universidad de La Laguna

Fecha de defensa: 17 de decembro de 2019

Tribunal:
  1. Julián Miguel Blanco Arbués Presidente/a
  2. Luis Fabián Lorenzo Díaz Secretario
  3. Fabien Blanchot Vogal
Departamento:
  1. Medicina Física y Farmacología

Tipo: Tese

Teseo: 605940 DIALNET

Resumo

La proteína auxiliar Nef del virus de la inmunodeficiencia humana es un factor importante para la patogénesis y la infección del VIH-1. En esta Tesis Doctoral se describe la acción de Nef sobre la enzima celular HDAC6, proteína con actividad antiviral. HDAC6 ejerce su acción anti-VIH-1 promoviendo la degradación de las proteínas virales Pr55Gag y Vif, a través de la ruta de formación del agresoma que lleva a la autofagia. Nef contrarresta esta actividad antiviral de HDAC6 induciendo su degradación por vía endosomal/lisosomal con la implicación de enzimas que actúan a pH ácido, y por lo tanto, estabilizando a las proteínas virales Pr55Gag y Vif. Ensayos de coinmunoprecipitación y microscopía confocal confirman la interacción y colocalización respectivamente entre ambas proteínas, y la utilización de distintos mutantes de Nef ofrece información sobre las regiones importantes de la molécula para ejercer esta acción degradativa sobre HDAC6. Los datos obtenidos con el mutante Nef-G2A revelan que Nef no necesita estar asociado a la membrana plasmática para interaccionar y degradar a HDAC6. Tampoco se ve afectada su acción degradativa en el caso del mutante Nef-EA, que tiene alterada la región de Nef importante para su interacción con los adaptadores AP-2/-3, sólo conservando la capacidad de interacción con el adaptador AP-1 que parece ser suficiente para ejercer su acción degradativa. Sin embargo, la región rica en polipropolina P72xxP75 (69-77 aa) y el motivo de di-Leucina en la secuencia Nef-ExxxLL160-165 de Nef, parecen ser responsables del aclaramiento de HDAC6 y, por lo tanto, son necesarios para la función proviral de Nef. Tanto wt-Nef como el mutante Nef-G2A coinmunoprecipitan con HDAC6, mientras que el mutante Nef-PPAA mostró una interacción reducida con la proteína. Por lo tanto, el motivo P72xxP75 parece ser responsable, directa o indirectamente, de la interacción de Nef con HDAC6. Además, la función proviral anti-HDAC6 de Nef asegura el correcto ensamblaje de Gag en la superficie celular, como se observa mediante TIRFM, promoviendo la salida de los viriones nacientes. Por lo tanto, nuestros resultados sugieren que HDAC6 actúa como factor de restricción anti-VIH-1, limitando la producción viral y la infección al afectar a la estabilidad de las proteínas virales Pr55Gag y Vif. Esta función sería contrarrestada por el factor proviral Nef, asegurando la producción e infectividad virales. La interacción entre Nef y HDAC6 puede determinar el curso de la infección viral y la patogénesis del VIH-1, representando ambas moléculas objetivos clave para combatir el VIH.