Caracterización molecular e inmunológica del antígeno recombinante rhcp26/23 de haemonchus contortus. Ensayos vacunales

Resumo

Las gastroenteritis parasitarias por helmintos constituyen una de las enfermedades parasitarias más frecuentes del ganado ovino a nivel mundial. Dentro de estos procesos se encuentra la hemoncosis ovina, enfermedad causada por el nematodo gástrico H.contortus, responsable de numerosas pérdidas económicas. El control de este proceso ha radicado, casi exclusivamente, en el uso de fármacos antihelmínticos; sin embargo su uso indiscriminado, y en ocasiones no relacionado con los procesos, ha ocasionado la aparición de resistencias frente a los principales principios activos. Ante esta situación la alternativa es la inmunoprofilaxis. Son numerosos los antígenos que han mostrado eficacia frente a H.contortus, si bien la dificultad en la obtención de cantidades suficientes de estos hace que sea necesario recurrir a nuevas tecnologías -ADN recombinante- para obtener antígeno en cantidades abundantes que permitan disponer de una vacuna comercial, sin embargo, hasta el momento ninguno de los antígenos recombinantes probados han mostrado la misma eficiencia que su homólogo natural. La fracción antigénica p26/23 es una de las que han mostrado su poder inmunoprotector frente a H.contortus, y dado que su homólogo recombinante no había sido probado nos propusimos el aislamiento, purificación y caracterización de la proteína p26/23, su secuenciación, clonación y expresión en E.coli (rHcp26/23), tanto en condiciones nativas como desnaturalizantes, valorando su poder inmunoprotector en un ensayo vacunal con corderos de 3 meses de edad. A partir de membranas de nylon electrotransferidas con ESA se escindieron los péptidos de 24 kDa (p26/23), tras su identificación con sueros de ovejas vacunadas en experimentos anteriores. El producto así obtenido fue sometido a cromatografía de fase reversa (RP-HPLC), eliminando posibles contaminaciones con péptidos comigrantes, obteniendo un único péptido purificado de ca. 24kDa (p26/23). El péptido obteni