Clonación y análisis molecular del gen codificante de la topoisomerasa ii del protozoo parásito l. Infantum

Zusammenfassung

Los tripanosomátidos contienen una única mitocondria con un singular tipo de DNA llamado DNA del kinetoplasto, formado por dos tipos de DNA circular: los minicírculos y los maxicírculos. Al contrario de lo que ocurre en los eucariotas superiores, la replicación del DNA mitocondrial y nuclear es simultánea. Mientras los maxicírculos permanecen unidos a la red del kDNA durante la replicación, los minicírculos son liberdos de la red, replicados y posteriormente unidos una vez que ha finalizado la fase S. Para la liberación y unión de los minicírculos de la red de kDNA, muy compleja topológicamente, es necesaria la presencia de una DNA topoisomerasa. En este trabajo se ha clonado el gen que codifica la proteína DNA topoisomerasa II asociada al kinetoplasto de Leishmania infantum; se ha realizado un estudio del producto de transcripción del gen a lo largo del ciclo vital y celular del parásito; se ha expresado la proteína recombinante en E.coli; se han realizado el análisis de localización subcelular de la proteína y se ha demostrado la actividad del producto del gen clonado por complementación y ensayos de actividad en levadura.