La funcion de la proteina snap-25 en la secrecion en celulas cromafines bovinas

Résumé

El proceso de fusión de las membranas de las vesiculas de almacenamiento de neurotransmisores y la membrana plasmatica celular o exocitosis es un evento clave del desarrollo de la funcion de los sistemas neuronal y endocrino. Las toxinas botulínicas han sido un elemento clave para la caracterizacion de una serie de proteinas denominadas SNARE que parecen participar en los mecanismos de fusión de membranas desde los sistemas constitutivos de la secrecion en levaduras hasta el proceso exocitotico de liberacion de neurotransmisores en las celulas excitables de los organismos superiores. Estos procesos parecen fundamentarse en la interaccion especifica de proteinas de las membranas vesiculares (v-SNAREs) como sinaptobrevina y plasmaticas (t-SNAREs) como sintaxina y SNAP-25 para producir el "atraque" vesicular y la liberación regulada por Ca2+ de los contenidos de neurotransmisores u hormonas. En esta tesis se ha empleado la toxina botulínca A para definir la funcion de la proteina SNAP-25 en el proceso secretor de la célula cromafin (libera catecolaminas al torrente sanguineo en respuesta a situaciones de estrés o de peligro). Ademas se han empleado herramientas moleculares como la sobre-expresion de formas alteradas de SNAP-25 de forma que nos permiten estudiar la función de otras regiones de la proteina fuera de la zona de proteolisis inducida por la toxina. La combinación de estas herramientas moleculares con tecnicas de alta resolución temporal y espacial para la monitorizacion de la neurosecreción como es la amperometria y la formacion de complejos de fusión "in vitro" nos ha permitdo inferir la participación de esta proteina en distintas etapas de las cascadas de secreción, desde el atraque vesicular hasta el proceso fusión propiamente dicho. Incluso la importancia del residuo Leu203 para mantener la funcion exocitótica de SNAP-25.