Evaluación de la capacidad antimicrobiana y antioxidante de potenciales productos bioactivos de origen vegetal

  1. Christian Zorzetto
Supervised by:
  1. Candelaria del Carmen Sánchez Mateo Director
  2. Rosa María Rabanal Gallego Director
  3. María de los Ángeles Arias Rodríguez Director

Defence university: Universidad de La Laguna

Year of defence: 2016

Committee:
  1. Roser Vila Casanovas Chair
  2. María Pilar Arévalo Morales Secretary
  3. Carlo Polidori Committee member
Department:
  1. Medicina Física y Farmacología

Type: Thesis

Abstract

El incremento de las infecciones humanas y de las enfermedades crónicas degenerativas, junto con los progresos en los conocimientos en fitoquímica para la búsqueda de nuevas moléculas con actividad biológica, han motivado la realización de este trabajo. En el mismo se explora, por primera vez, la eficacia como antioxidante, citotóxico y antimicrobiano frente a cepas de bacterias multirresistentes de diferentes extractos obtenidos de varios hipéricos de las Islas Canarias usadas en la medicina tradicional canaria por sus propiedades vulnerarias, cicatrizantes y antibacterianas, entre otras. Las especies objeto de esta investigación fueron: el granadillo (Hypericum canariense L.), la malfurada (Hypericum grandifolium Choisy) y la cruzadilla (Hypericum reflexum L. f.), siendo este último recolectado en dos puntos diferentes de Tenerife. De las tres especies de hipérico se obtuvieron el aceite esencial, el extracto Soxhlet y el metanólico, así como a partir de este último la fracción clorofórmica y la polar. Tras el análisis fitoquímico mediante técnicas cromatográficas de alta eficacia (HPLC-DAD y HPLC/ESI-MS), se evidenció una elevada presencia de compuestos polifenólicos en las especies en estudio, siendo especialmente abundante el ácido clorogénico y la rutina en el Hypericum reflexum. Asimismo, sólo se encontró una pequeña cantidad de hipericina en el Hypericum reflexum de Ifonche. El análisis de los aceites esenciales mediante GC-MS y GC-FID mostró que los componentes mayoritarios en todos los aceites esenciales estudiados están relacionados con la fracción de hidrocarburos, destacando n-nonano, n-undecano, (E)-cariofileno, α-pineno y β-pineno. Asimismo, se pudo constatar una variabilidad en la composición de las sustancias volátiles entre las dos especies de Hypericum reflexum recogidas en diferentes zonas de la isla. Cuando se llevó a cabo el estudio de la capacidad antioxidante mediante tres métodos diferentes (DPPH, ABTS y FRAP), comprobamos que todos los extractos y fracciones de las especies en estudio, con excepción de los aceites esenciales, presentaron actividad antioxidante en las tres pruebas, sobresaliendo entre ellos las fracciones polares que presentaron una actividad comparable a la obtenida con el Trolox (antioxidante de referencia). Los aceites esenciales sólo mostraron actividad antioxidante por el método ABTS, aunque inferior a la observada con el resto de los extractos ensayados. El estudio de la actividad antimicrobiana se realizó frente a varias bacterias Gram positivas y Gram negativas, así como frente a diferentes cepas de SARM y BLEE, mediante el método de difusión en agar y el de microdilución. Encontramos que todos los extractos ensayados presentaron una moderada actividad frente a las bacterias Gram positivas, pero ninguna actividad frente a las Gram negativas, destacando los valores de CMI encontrados para el extracto Soxhlet de Hypericum grandifolium. Por otro lado, si bien todos los extractos de hipéricos analizados mostraron una moderada actividad antimicrobiana por el método de difusión en agar frente a las cepas SARM ensayadas, todos presentaron valores de CMI altos por el método de microdilución. Finalmente, se evaluó la citotoxicidad in vitro mediante el método MTT sobre diferentes líneas de células tumorales: melanoma humano (A375), carcinoma mamario humano (MDA-MB 231) y carcinoma humano de colon (HCT116). Tras la realización de esta prueba, comprobamos que todos los extractos presentaron actividad citotóxica frente a todas las líneas tumorales ensayadas, siendo los aceites esenciales los más potente. Sobresale entre todos ellos el aceite esencial del Hypericum reflexum que mostró una actividad citotóxica comparable a la del cisplatino (fármaco de referencia). En resumen, los hipéricos estudiados en nuestra investigación mostraron una eficaz capacidad antioxidante, una leve acción antimicrobiana frente a bacterias multirresistentes y una potente actividad citotóxica frente a células tumorales.