Modulación estrogénica de la respuesta colinérgica en una línea celular de neuronas productoras de lhrh

Resumen

En eta tesis doctoral se ha abordado a nivel celular un problema fisiológico relacionado con la regulación estrogénica del sistema reproductor en la hembra, como es el mecanismo de retroalimentación negativa del sistema LHRH-LH. Esta es una cuestión clásica de la neuroendocrinología y fisiología reproductora que no ha sido suficientemente explicada hasta el momento. Los objetivos abordados son: 1,- La validación de la línea celular GT1-7 hipotalámica como modelo adecuado para el estudio de la fisiología de las neuronas productoras de LHRH. 2,- El estudio y caracterización de la señal de calcio inducida por acetilcolina en este modelo celular, así como el efecto del 17beta-estradiol en la modulación de esta señal. 3,- La determinación de los mecanismos de actuación intracelular de 17beta-estradiol en este efecto. 4,- El estudio de la presencia de sitios de unión para el estradiol en la membrana plasmática de estas células. Para abordar estos objetivos se ha utilizado la siguiente metodología: cultivos celulares, medidas de calcio intracelular, cuantificación de segundos mensajeros, identificación de sitios de unión al estradiol, inmunocitoquímicas, RT-PCR. Los resultados obtenidos demuestran que la línea celular GT1-7 es un modelo válido para el estudio de las neuronas LHRH, y que la acetilcolina actúa sobre estas células induciendo un aumento rápido de los niveles intracelulares de calcio, actuando a través de receptores colinérgicos muscarínicos. Esta acción de la acetilcolina es modulada de forma rápida por el estradiol, a través de un mecanismo que parece iniciarse en la membrana plasmática de las células y que implica la activación de la proteina kinasa dependiente de GMPc. Esta acción del estradiol no está relacionada con sus receptores intracelulares clásicos. Además, se ha observado la presencia de sitios de unión específicos para el 17beta-estradiol en la membrana plasm