Aplicación de rapd para el diagnostico y estudio molecular de leishmania braziliensis

Résumé

En la presente tesis doctoral se utiliza la técnica RAPD(Random Amplified polimorphic DNA), con diferentes finalidades. Se usa para caracterizar diferentes especies del género Leishmania obteniéndose un patrón de amplicación característico para cada una de ellas el cual permite su identificación. Los fragmentos obtenidos tras la amplificación son analizados para conocer su naturaleza obteniéndose que ninguno de los analizados se encuentra repetido en el genoma y que los fragmentos que amplifican se encuentran favorecidos para ello. Los fragmentos amplificados se utilizan también para el diseño de cebadores específicos para la identificación de L. Braziliensis desde cultivo y desde muestras biológicas como sangre, etc. Dos de los fragmentos amplificados denominados Lb26 y Lb30 se utilizan como sondas para la realización de una búsqueda en una genoteca de cDNA de la que se obtuvieron diversos clones. De estos clones fueron secuenciados y caracterizados dos de ellos, codificantes para la proteína ribosomal L-14 y para una histona H1 de L. Braziliensis. El gen que codifica para la histona H1 es de copia única y se transcribe en un solo ARNm.