Heterogeneidad de las vesículas secretoras en la célula cromafín

  1. Marta Rodríguez Pardo
Supervised by:
  1. Ricardo Borges Jurado Director
  2. José David Machado Ponce Director

Defence university: Universidad de La Laguna

Year of defence: 2015

Committee:
  1. María Teresa Miras Portugal Chair
  2. Carmen María Evora García Secretary
  3. Federico Gago Badenas Committee member
Department:
  1. Medicina Física y Farmacología

Type: Thesis

Teseo: 387914 DIALNET

Abstract

Los gránulos cromafines se han considerado tradicionalmente como una población única de vesículas grandes de núcleo denso (LDCV, del ingles Large Dense Core Vesicles). Sin embargo, hay fuertes evidencias que demuestran que esto no es del todo cierto. Por ejemplo, el uso microscopio electrónico nos ha mostrado diferencias morfológicas y de electrodensidad, las cuales han servido para clasificar las vesículas como adrenérgicas o noradrenérgicas (Coupland, 1965). Otras técnicas electroquímicas como la amperometría o voltametría cíclica revelan una alta heterogeneidad tanto en el contenido vesicular de aminas como en la cinética de la exocitosis, incluso dentro de una misma célula (Machado et al., 2001, Ciolkowski et al., 1992). En los últimos años nuestro grupo ha venido trabajado en cómo afecta el contenido intravesicular a los últimos pasos de la exocitosis, y disponemos de ratones carentes de cromograninas. En las células cromafines de estos modelos murinos, hemos demostrado que la ausencia de CgA y CgB causa una importante disminución de la acumulación de CAs y modifica la cinética de la exocitosis (Diaz-Vera et al., 2012; Diaz-Vera et al., 2010; Montesinos et al., 2008). En esta tesis hemos fenotipado a estos ratones sin encontrar grandes alteraciones que no desaparecieran con la edad. Hemos concluido que la disminución en el contenido de CA es debida a una excreción no exocitótica, y no a una alteración en las rutas de biosíntesis o de degradación, ya que encontramos una elevación en la excreción urinaria de CA y sus metabolitos También hemos llevado a cabo el análisis de LDCV aisladas de las médulas suprarrenales estos ratones. Conseguimos así obtener fracciones de vesículas altamente enriquecidas en adrenalina y noradrenalina; y analizamos sus características físico-químicas (tamaño, densidad, contenido en ATP, CA y proteínas), poniendo de manifiesto una gran heterogeneidad entre ellas. Combinando las técnicas de DLS y de HPLC-ED estudiamos la dinámica granular y concluimos que la entrada de ATP en las vesículas secretoras es fundamental para la acumulación de CA; y que en ausencia de cromograninas los gránulos secretores son mayores. Por último pusimos a punto la citometría de flujo para el análisis de vesículas aisladas. Empleando múltiples marcajes evidenciamos la existencia de una población de gránulos que no parecen tener capacidad de hacer exocitosis.