Análisis molecular de la interacción entre el hongo fitopatógeno botrytis cinerea y sus hospedadoresmutagénesis mediante silenciamiento génico post-transcripcional y estudio sistemático del proteoma extracelular

Résumé

Botrytis cinerea es un hongo filamentoso capaz de infectar mas de 200 especies vegetales, causando la enfermedad llamada podredumbre gris. La falta de metodos de control para este organismo, hace la busqueda de nuevos factores de patogenicidad de este patogeno, sea un area primordial, con el fin de diseñar estrategias que conlleven al control de la enfermedad. En este sentido, la identificacion de proteinas potencialmente implicadas en los primeros estadios de germinacion del hongo, ha sido un objetivo primordial en esta tesis. Estas proteinas serían las responsables del establecimiento con exito de la enfermedad, por lo que su identificacion, y el analisis funcional del gen que la codifica, conllevarían al conocimiento en mayor profundidad de las interacciones que se establecen entre el hongo y el hospedador. Entre las proteinas secretadas (tambien llamado proteoma extracelular) por el hongo en los primeros estadios de la infeccion, destaca la gran abundancia en todos los medios de induccion ensayados, la presencia de la aspartil proteasa BcAP8. Esta proteina fue objeto de estudio en el presente trabajo. Por último, para el estudio de genes potencialmente implicados en la infección, se recurre de manera habitual a su mutagenesis dirigida, para luego comprobar el fenotipo del mutante obtenido. En el caso de Botrytis, su naturaleza multinucleada dificulta el proceso de obtención de transformantes en los que todos sus nucleos esten mutados en el gen de interes. En este sentido, una nueva herramienta en biologia molecular, podria resultar de utilidad en el analisis funcional de genes, ya que resulta en la inhibicion de la sintesis de una determinada proteina sin necesidad de recurrir a la mutacion del gen. Este fenomeno se llama silenciamiento genico post-transcripcional. El ultimo objetivo del trabajo, consistio en estudiar la eficacia de dos aproximaciones experimentales para conseguir desatar el fenomeno en Botrytis.