Nuevas terapias frente al protozoo parásito oportunista acanthamoebamecanismos de acción a nivel molecular y estructural

Résumé

Esta tesis doctoral ha sido realizada en el Instituto Universitario de Enfermedades Tropicales y Salud Pública de Canarias, como alumna del departamento de Parasitología, Ecología y Genética, dentro del área de Parasitología, de la Universidad de La Laguna. La línea de investigación que se ha seguido unifica estudios previos realizados en este centro, con amebas de vida libre del género Acanthamoeba, junto con una nueva línea de quimioterapia frente a este protozoo parásito. Las amebas del género Acanthamoeba son los agentes causales de una infección ocular denominada queratitis por Acanthamoeba que afecta, principalmente, a usuarios de lentes de contacto. La primera parte de este trabajo ha sido un estudio poblacional acerca del uso de lentes de contacto y la incidencia de contaminación de los estuches en una población de la isla de Tenerife (Martín-Navarro et al., 2008). A partir de los estuches obtenidos en el muestreo, se realizó el aislamiento y caracterización de amebas del género Acanthamoeba. Mediante el análisis de las proteasas extracelulares que secretaban se pudieron caracterizar cepas potencialmente patógenas. Tras someter a tres aislados seleccionados a diversas pruebas de patogenicidad, se demostró que éstos eran altamente patógenos (Martín-Navarro et al., 2008; 2010), por lo que fueron escogidos para su utilización en el resto de estudios de este trabajo. Debido a que no existe un tratamiento único eficaz contra las infecciones causadas por este parásito, es necesario encontrar y validar nuevas dianas terapéuticas. Para ello se empleó la técnica del ARN de interferencia (ARNi). Este método había sido previamente utilizado para validar el efecto que tiene inhibir las serín-proteasas extracelulares y la glucógeno fosforilasa sobre la capacidad patógena de Acanthamoeba (Lorenzo-Morales et al., 2005; 2008; 2010). En este trabajo se validaron, además, la miosina-IC (En colaboración con el Centre for Integrative Physiology, School of Biomedical Sciences, University of Edinburgh, Escocia, Reino Unido) y la HMG-CoA reductasa, proteínas escogidas por ser claves en diferentes procesos vitales para Acanthamoeba. La utilidad de estas dianas fue comprobada, por lo que se evaluaron principios activos que actuaran a su nivel y que pudieran ser propuestos como tratamientos frente a las infecciones causadas por este parásito. Aquellos que resultaron ser activos contra los aislados clínicos altamente patógenos y a la cepa de referencia, Acanthamoeba castellanii Neff, y que, además, provocaban bajos niveles de citotoxicidad en células de mamíferos, fueron seleccionados para evaluar el tipo de muerte celular que provocaban. Con el fin de evitar el proceso inflamatorio que se desencadenaría si los parásitos murieran por necrosis, un tratamiento contra ellos debería producir su muerte mediante un mecanismo apoptótico. Además, en el caso de infecciones por Acanthamoeba y debido a que el quiste resiste condiciones extremas (incluyendo resistencia a quimioterapias), es igualmente importante que se inhiba su formación ya que, tras la finalización del tratamiento, la infección podría manifestarse nuevamente. Los principios activos evaluados provocaron la muerte del parásito mediante mecanismos apoptóticos. Así mismo, se observó que fueron capaces de inhibir el enquistamiento de Acanthamoeba (experimentos desarrollados en colaboración con el Laboratoire de Chimie et Microbiologie de l¿Eau. Université de Poitiers, Francia). Esta es la primera vez que se describe el proceso de muerte celular programada en este género, además de la presencia de proteínas implicadas en estos mecanismos como son la caspasa-3 y AKT. Por todo lo anteriormente expuesto, estos principios activos se proponen como futuro tratamiento de elección frente a infecciones provocadas por Acanthamoeba.