Estudios moleculares sobre la neuraminidasa de Mannheimia haemolytica 2

  1. Vanesa Fernández Martínez
Supervised by:
  1. Ángel Reglero Chillón Director
  2. Ignacio González Bravo Director

Defence university: Universidad de León

Year of defence: 2007

Committee:
  1. Francisco A. Rojo Vázquez Chair
  2. José María Luengo Rodríguez Secretary
  3. María Ángeles Serrano García Committee member
  4. Pablo Martín Vasallo Committee member
  5. Pilar de la Peña Cortines Committee member

Type: Thesis

Teseo: 135877

Abstract

Mannheimia haemolytica se ha aislado desde la mucosa del tracto respiratorio superior de los rumiantes domésticos como parte de la microflora comensal y ocasionalmente como patógeno oportunista. Entre los factores de virulencia responsables de la patogenicidad se han propuesto: adhesinas, lipopolisacárido, cápsulas, proteínas de membrana externa y lipoproteínas, IG-proteasas, leucotoxina, glicoproteasa, hemolisina y neuraminidasa. La nuraminidasa, es un exoglicosidasa que hidroliza los enlances a-glicosídicos que se encuentran en los ácidos siálicos que están unidos en posición terminal en gliconjugados en animales superiores y algunos microorganismos. Como resultado del trabajo experimental se citan las siguientes conclusiones: 1.- Se ha descrito, por primera vez, la cinética de aparición de la neuraminidasa de M. haemolytica 2 en diferentes medios de cultivo definidos y no definidos, observándose que la máxima actividad enzimática se obtiene en el medio complejo BHIB en el que la enzima aparece de forma gradual y paralelamente al crecimiento celular hasta la última etapa de la fase logarítmica, alcanzando el máximo en la fase estacionaria temprana tras 6-7 horas de crecimiento a 37ºC y 200 rpm. 2.- Se ha purificado parcialmente la neuraminidasa de M. haemolytica 2 mediante dos procedimientos diferentes. La enzima tiene una temperatura óptima de 37ºC, temperatura a la que presenta una actividad residual superior al 80% después de una hora de exposición. Su pH óptimo es de 6,0 y es estable en condiciones ligeramente ácidas, lo que concuerda con e pH de la mucosa del tracto respiratorio superior del ganado vacuno, ovino y caprino donde la bacteria forma parte de la microflora comensal. 3.- La neuraminidasa de M. haemolytica 2 hidroliza los enlaces a(2-3) presentes en N-acetilneuraminil-D-lactosa, 3'-N-acetilneuraminil-D-lactosa, 3'-N-aceitilneuraminil-D-lactosamina, fetuína y orosomucoide así como los enlaces externos a(2-3) existent