Dinámica de citoesqueleto durante la secreción por microscopia de luz transmitida en células cromafines

Resum

Las imágenes obtenidas por microscopía de luz transmitida empleando objetivos de gran aumento muestran una compleja y dinámica red estructural citoplasmática en células cromafines bovinas en cultivo. Estas estructuras se ven afectadas por agentes químicos que alteran la distribución y/o función del complejo f-actina-miosina. Además estas estructuras colocalizan con la barrera periférica de f-actina, beta-actina y el subtipo II de miosina. Por otro lado, inductores de la secreción producen un proceso de desorganización dependiente de calcio, rápido (inferior a los 10 segundos) y transitorio (en ciclos de aproximadamente 60 segundos) de estas estructuras corticales. Estos cambios se ven acompañados por la formación simultánea de dos estructuras características. En primer lugar, estas estructuras se organizan perpendicularmente a la membrana plasmática formando estructuras tipo canal que permiten el transporte de las vesículas secretoras desde las regiones citoplasmáticas más internas a los límites externos de la célula. En segundo lugar, se observa la formación de espacios abiertos desprovistos de f-actina en las regions citoplasmaticas más internas. Las vesiculas se desplazan a traves de estas estructuras de f-actina evitando difundir por las regiones citoplasmáticas desprovistas de f-actina. Además, estas reorganizaciones corresponden a una transferencia de f-actina desde las regiones externas correspondientes a la barrera cortical hasta las regiones citoplasmáticas adyacentes tal y como queda demostrado en los estudios sobre los cambios asociados a la fluorescencia en estas regiones en células que sobrexpresan GFP-beta-actina. Por último, al caracterizar las oscilaciones sufridas por los niveles de calcio durante la secreción mediante el empleo de sondas fluorescentes afín a este ión (fluo3-AM) se detectaron dos fenómenos que relacionan el citoesqueleto de f-actina con las zonas de mayor niveles de calcio. En primer lugar, se obse