Producción de YTX por cultivos de Protoceratium reticulatumvariabilidad en el perfil de toxinas de diferentes cepas

Resumen

Las yesotoxinas son, supuestamente, toxina cardiotóxicas y citotóxicas que se han catalogado clásicamente como toxina diarreica, pues debido a sus propiedades de solubilidad común se co-extraen con las toxinas diarreicas y originan falsos positivos en el bioensayo en ratón, pero en realidad no causan diarrea. Como consecuencia de dicha interferencia se producen cierres erróneos e innecesarios de zonas de marisqueo con una importante repercusión económica. Con la finalidad de detectar la presencia de YTXs en los extractos para DSP y poder descartar los falsos positivos hay que recurrir a métodos químicos alternativos y/o complementarios al bioensayo con ratón. Estos métodos implican el uso de patrones de YTXs a partir de cultivos de dinoflagelados. Posteriormente, con los métodos puestos a punto, se estudiaron los organismos supuestamente productores de YTXs disponibles en la Colección de Cultivos del Centro Oceanográfico de Vigo para su utilización como fuente para purificar YTXs. Se confirmó la producción de YTX por cultivos de Protoceratium reticulatum procedentes de España y de América del Norte y se demostró la producción de bajas concentraciones de YTX por cultivos de Lingulodinium polyedrum aislados en España. Paralelamente, con el fin de optimizar la condiciones de producción de YTXs en cultivo, se selección la primera cepa de P. reticulatum aislada en aguas españolas y se estudió el efecto conjunto de la irradiancia, temperatura, salinidad y agitación sobre su crecimiento y producción de YTXs. Aplicando una serie de análisis factoriales se determinó que el factor con más influencia en la producción de YTXs es la irradiancia. Además, se encontró que la YTX está presente tanto en células como en el medio de cultivo y en diferentes concentraciones dependiendo de la s condiciones y la fase de cultivo. El escalado del cultivo de P. reticulatum permitió la producción de YTX en cantidad suficiente para llevar a cabo su aislamiento, purificación y su ulterior uso como patrón secundario en esta tesis tanto en los métodos químicos como biológicos. A su vez, los extractos de la citada cepa de P. reticulatum fueron utilizados en el proceso de purificación e identificación de nuevos derivados glicosilados de YTX, las glicoyesotoxinas (G-YTX). Finalmente, el estudio de diferentes cepas de P. reticulatum aisladas en España, utilizando pequeños volúmenes de muestra, permitió determinar que el perfil e YTXs difiere entre ellas, encontrándose cepas que producen una gran variedad de análogos e incluso cepas que no producen YTXs.