Biosíntesis de ácidos siálicos en eucariotasestudio de la CMP-Neu5Ac sintetasa de rata

Résumé

Los ácidos siálicos son un grupo importante de moléculas implicadas en los procesos de reconocimiento y diferenciación celular derivados del acido neuraminico cuyo metabolismo está regulado por medio de la CMP-Neu5Ac sintetasa. El aislamiento y purificación de esta enzima en rata nos ha permitido establecer que en su estado nativo se comporta como un dinero formado por dos protómeros idénticos de 58 kDa. Muestra unas condiciones óptimas de ensayo para una temperatura de incubación de OM.C y un pH de 9. Los parámetros cinéticos de la reacción (Km) para cada uno de los sutratos son de 1,1 mM (para el Neu5Ac) y de 0,45 mM (para el CTP). Concentraciones superiores a 5 mM del sustrato CTP inhiben la actividad de la enzima con una Ki de 17,2 mM. La enzima puede utilizar como sustratos, con la misma eficacia, tanto el Neu5Ac como el Neu5Gc. En ambos casos muestra un rquerimiento absoluto de cationes Mg++ para llevar a cabo su función catalítica. Concentraciones crecientes de CMP-Neu5Ac, producto de la reacción, producen una progresiva inhibición de la actividad enzimática, regulando de este modo la actividad de la CMP-Neu5Ac sintetasa y a su vez el metabolismo de los ácidos siálicos. El análisis proteolítico de la CMP-Neu5Ac sintetasa de rata ha revelado la existencia de diferentes dominios estructurales con pesos moleculares de 56, 53, 51, 42, 41, 39 y 31 kDa flanqueados por zonas desestructuradas accesibles a la acción de las distintas proteasas. La presencia de los distintos sustratos modifica sustancialmente esta distribución estructural.