Caracterización de proteínas de la pared celular en candida albicans

Resumen

Tras la anotación parcial del genoma de Candida albicans, se realizó un estudio in silico de la base de datos de C.albicans. Se seleccionaron dos genes con características de proteínas de pared celular, la IPF 3054 con una homología de un 62% con el gen ScSSR1 (Secretory Stress Response protein) de Saccharomyces cerevisiae, al que se llamó CaSSR1 y la IPF 564. Se realizó la interrupción de ambos genes con el fin de estudiar la implicación en la construcción de la pared celular. La interrupción del gen Ca SSR1 causó una mayor sensibilidad que la cepa parental al calcofluor white y rojo Congo, sustancias que distor-sionan los polímeros de la pared celular. El estudio del material liberado por la enzima zimiliasa, con actividad mayoritariamente B-1,3-glucanasa, mostró la desaparición de una especie proteica de 70 Kda. La sobreexplotación del gen CaSSR1 en la cepa mutante para el gen CaSRR1 provocó la aparición de novo de la especie proteica en el extracto de zimoliasa de la cepa sobreexpresante del gen CaSSR1. Con el fin de localizar las proteínas CaSSR1 y Ca564 se etiquetaron con el epitopo c-myc, introduciéndose después del corte con la peptidasa señal, la localización en C.albicans no pudo realizarse con este epitopo, en cambio en S.cerevisiae fueron detectadas estas proteínas en los extractos de SDS y en la fracción mixta de membranas. Se realizó un estudio del sitio de anclaje mediante GPI a la pared celular de la proteína CaSsr1, se realizaron varias construcciones en las que fueron eliminadas la región hidrobfóbica correspondiente a los aminoácidos 217 y 234, implicada en el anclaje y la región w, w+1, w+2, correspondiente a los aminoácidos 199 a 201, descrita como necesaria en el anclaje a la pared celular. Las distintas versiones se introdujeron en la cepa mutante para el gen CaSSR1, y se estudió el anclaje a la parede de las distintas versiones, en el caso de la versión en la que se eliminó