Desarrollo de técnicas moleculares basadas en la pcr para la detección de aspergillus fumigatus

  1. Ana Abad
Supervised by:
  1. Fernando Luis Hernando Echevarria Director
  2. Aitor Rementería Ruiz Director

Defence university: Universidad del País Vasco = Euskal Herriko Unibertsitatea

Year of defence: 2009

Committee:
  1. José Pontón San Emeterio Chair
  2. Javier Garaizar Candina Secretary
  3. Josep Guarro Artigas Committee member
  4. María Pilar Arévalo Morales Committee member
  5. José Francisco Cano Lira Committee member

Type: Thesis

Teseo: 284699 DIALNET

Abstract

Aspergillus fumigatus es un hongo oportunista capaz de producir un gran número de enfermedades, destacando por su elevada mortalidad la aspergilosis invasora. La falta de métodos diagnósticos adecuados hace que el tratamiento sea tardío y colabora en la elevada mortalidad de sus infecciones. La patogenia de este hongo es multifactorial y poligénica y no se encuentra bien definida. En este estudio se seleccionaron 30 genes de este hongo descritos como factores de virulencia en la bibliografía y se desarrollaron reacciones de PCR para su amplificación. Se contrastó la especificidad de las regiones amplificadas mediante el desarrollo de un microarray de ADN y estudios de hibridación competitiva con 11 especies de hongos. Se realizó también un ensayo de PCR a tiempo real y se aplicaron los sistemas de detección desarrollados a un modelo de infección animal. Las PCR descritas para los genes rodB, mitF, aspHS, mep20, pep y pabaA permiten diferenciar A. fumigatus / A. lentulus de N. udagawae y de otras 15 especies de hongos. Con la PCR a tiempo real desarrollada para una secuencia del gen aspHS, estableciendo un punto de corte (Ct) en 34 ciclos, puede detectarse A. fumigatus de forma rápida y sensible, diferénciándola de otras especies de hongos, incluida N. udagawae, aunque no pueda ser diferenciada de A. lentulus. De las PCR convencionales desarrolladas, 29 permiten la detección de la infección por A. fumigatus en tejidos, en el modelo de infección propuesto, mediante amplificación seguida de electroforesis en gel de agarosa. Sin embargo, ninguna de las técnicas desarrolladas puede diferenciar A. lentulus y A. fumigatus.