Evaluation of medicinal plants from morocco as novel source of anti-parasitic agents

  1. Ikrame ZEOUK
Supervised by:
  1. Jacob Lorenzo Morales Director
  2. Khadija Bekthi Director

Defence university: Universidad de La Laguna

Year of defence: 2021

Type: Thesis

Abstract

La aparición de la resistencia a los antimicrobianos es un enorme problema de salud pública que hace urgente el desarrollo de nuevas moléculas bioactivas. En este contexto, las plantas que supuestamente curan las infecciones cutáneas se seleccionan entre los herbolarios de la región de Fez-Meknes y las seleccionadas se someten a un fraccionamiento bioguiado para identificar los compuestos activos frente a Leishmania spp. y Staphylococcus aureus frecuentemente aislados en este tipo de patología en el área estudiada. Se enumeran 64 plantas, 15 especies que mostraron un índice de frecuencia de citas alto y una contribución bibliográfica baja para cada germen objetivo se evalúan por sus propiedades antimicrobianas. La prueba cualitativa utilizando el ensayo de macrodilución en agar reveló que el extracto etanólico de Rhamnus alaternus es el más activo contra las cepas de S. aureus, mientras que el ensayo de microdilución mostró que el extracto etanólico de Inula viscosa es el más activo contra Leishmania spp .. El fraccionamiento bioguiado, los análisis espectroscópicos y espectrométricos (RMN, EIMS y HREIMS) del extracto de Rhamnus alaternus dieron como compuestos activos emodina y kaempferol. Sin embargo, se encontró que la emodina era la más activa contra las cepas de S. aureus con valores de CMI de 1,93 y 15,63 μg / ml y CC50> 100 μg/ml, lo que refleja la no toxicidad de este compuesto. El fraccionamiento bioguiado del extracto de Inula viscosa a través de múltiples pasos cromatográficos que involucran gel de sílice y columnas sephadex LH-20, cromatografía plana y centrífuga preparativa permitió identificar mediante análisis espectroscópicos y de correlación (RMN, HMBC, HSQC y ROESY) ocho compuestos, entre los cuales cuatro (8-epi-xantatina-1β, 5β-epóxido e inuloxina A, sakuranetina y taxifolina) fueron las más activas contra las especies objetivo, Leishmania amazonensis y Leishmania donovani con IC50 entre 9.53 y 86.45 µM para promastigotes, y entre 0.64 y 6.98 µM para amastigotes. Se evaluó la citotoxicidad de los cuatro compuestos en una línea celular de macrófagos murinos (J774A.1) y el ensayo fluorimétrico usando el reactivo AlamarBlue mostró que los compuestos no son tóxicos a la dosis probada. Estos cuatro compuestos anti-Leishmania también fueron activos contra Trypanosoma cruzi, mientras que Naegleria fowleri fue susceptible únicamente a la inuloxina A. El mecanismo de acción de estos cuatro compuestos se ha dilucidado utilizando la viabilidad celular y kits para la detección de eventos de apoptosis. Los resultados obtenidos mostraron que estos compuestos indujeron eventos de tipo apoptótico en L. amazonensis, L. donovani, T. cruzi y N. fowleri por alteración de la permeabilidad de la membrana (kit SYTOX Green), condensación de cromatina (kit doble Hoechst33342 / PI), disrupción de función mitocondrial (sonda JC-1) y disminución de los niveles de producción de ATP (CellTiter-Glo) además de la regeneración de ROS (kit CellROX) en L. amazonensis, T. cruzi y N. fowleri.