La fosfofructokinasa-C de tumor ascítico de Ehrlich estructura, expresión y manipulación genética

Resumen

Se ha examinado la composición de subunidades e isozimas de la fosfofructokinasa (PFK) en células de tumor ascítico y glándula mamaria murina, el tejido de donde procede el tumor. La PFK tumoral contiene predominantemente subunidades C, siendo las L más abundantes en glándula mamaria, detectándose en ambos tipos de células una variante de la subunidad M de menor movilidad electroforética. Hemos aislado la secuencia codificante completa de la PFK-C tumoral que corresponde a una proteína de 784 aminoácidos y 85,5 kDa, en la que están conservados los residuos propuestos para la unión de substratos y efectores alostéricos y cuya expresión se mantiene constante a lo largo del crecimiento del tumor en ratones, disminuyendo cuando cesa la proliferación celular. Este enzima ha sido sobreexpresado en levadura habiéndose caracterizado como un tetrámero estable, cuyas propiedades reguladoras indican que la subunidad C es mayoritariamente responsable de la ausencia de activación por fructosa-1,6-P2 y la inhibición por P-enolpiruvato, peculiares de la actividad PFK global en células tumorales. Finalmente, la construcción de PFKs quiméricas portando la mitad N-terminal de la PKF-C tumoral y la C-terminal de la PFK-M de músculo humano y viceversa, ha permitido analizar la contribución funcional de cada dominio a la catálisis y el control alostérico, con especial interés en las características diferenciales de estas PFKs..