Regulacion de la nitrato y nitrito reductasa en la levadura hansenula polymorpha. Expresión heteróloga del gen NIA2 de nicotiana tabacum

Abstract

Esta Tesis estudia la regulación de las enzimas nitrato y nitrito reductasa en la levadura H. Polymorpha. Utilizando vectores de expresión no regulables por la fuente nitrogenada y fusiones de regiones 5¿no codificantes de los genes nitrato reductasa(YNR1) y nitrito reductasa(YNI1), fusionadas al gen reportero lacZ, se concluye que la regulación de la nitrato reductasa es fundamentalmente a nivel de la transcripción y que las fuentes de nitrógeno reducidas no poseen efecto postranscripcional sobre el ARNm,proteína o actividad nitrato reductosa. Sin embargo, existe una inactivación de la proteína en ausencia de fuente de carbono. La nitrito reductasa, también se regula fundamentalmente, a nivel de la transcripción. Además se ha realizado la expresión heteróloga del gen nia2, que codifica la nitrato reductosa de N.tabacum bajo el control de tres promotores diferentes, en una cepa de H. Plymorpha mutante para el gen YNR1. Para ello, se construyó un nuevo vector de expresión con las secuencias promotra y terminadora del gen YNR1, obteniéndose un nivel de expresión similar a una cepa silvestre, cuando se expresa el gen nia2 bajo el control del promotor del gen YNR1 de H. Polymorpha.