Patógenos zoonóticos en ectoparásitos de mamíferos de Canarias. Puesta a punto de un método rápido para el diagnóstico de Bartonella

Résumé

La presente Tesis Doctoral ha sido realizada en el Instituto de Enfermedades Tropicales y Salud Pública de Canarias, dentro del Departamento de Obstetricia y Ginecología, Pediatría, Medicina preventiva y Salud pública, Toxicología, Medicina legal y forense, y Parasitología de la Facultad de Ciencias de la Salud (Facultad de Farmacia). Diversas especies de artrópodos son vectores de una gran variedad de agentes zoonóticos, tales como Bartonella sp., Rickettsia sp. o Anaplasma sp. No obstante, los datos sobre estos agentes patógenos de transmisión vectorial en el archipiélago canario son escasos. Por ello, una parte de esta Tesis Doctoral se centró en la detección e identificación de Bartonella sp. en pulgas de roedores y en el propio roedor (Rattus rattus y Mus musculus domesticus) mediante la técnica PCR y posterior secuenciación. Dado el elevado número de especies y haplotipos diferentes de Bartonella sp., algunas de importancia clínica (Bartonella elizabethae, Bartonella rochalimae, Bartonella tribocorum, Bartonella kosoyi), encontrados tanto en el vector como en el hospedador, el estudio se amplió a pulgas de animales domésticos (perros y gatos), incluyéndose además la búsqueda de Rickettsia sp. En este caso, se detectó la presencia de Bartonella henselae y Bartonella clarridgeiae, causantes de la enfermedad por arañazo de gato, y Rickettsia felis, uno de los agentes ricketssiales causante de tifus. Otra parte del estudio se centró en el análisis de garrapatas, tanto asociadas a erizos como libres en la vegetación, dada la conocida relevancia de estos artrópodos en la transmisión de diversos agentes zoonóticos. En este caso, se analizó la presencia de Rickettsia sp. y Anaplasma sp., identificándose la especie patógena Rickettsia helvetica y la especie de patogencidad desconocida Rickettsia hoogstraalii en garrapatas obtenidas de la vegetación, y Rickettsia sp. en garrapatas de erizos de la especie Atelerix algirus. Finalmente, dada la elevada diversidad y relevancia clínica de las especies de Bartonella encontradas en el archipiélago, se ha puesto a punto un método rápido para la detección de Bartonella mediante la técnica RPA. Este método nos ha permitido detectar la presencia de Bartonella en muestras de campo mediante el empleo de cebadores diseñados para la PCR convencional, a concentraciones de ADN muy inferiores a las necesarias para la PCR, a temperatura ambiente y sin emplear dispositivos eléctricos, y en un tiempo mucho más reducido. Todo ello convierte a la RPA en una técnica muy sensible, rápida y fiable para la detección de especies de Bartonella tanto en diagnóstico de laboratorio como de campo, con potencial aplicación en el desarrollo de kits rápidos de detección.