Regulación de la infección por vih-1 mediante el control de la formación del poro de fusión, por alteración del tráfico de membrana y la reorganización del córtex de actina

  1. Laura García Expósito
Supervised by:
  1. Agustin Valenzuela Fernandez Director

Defence university: Universidad de La Laguna

Year of defence: 2012

Committee:
  1. José Manuel Siverio Expósito Chair
  2. José David Machado Ponce Secretary
  3. Pedro Lorenzo Majano Rodríguez Committee member
  4. Maria Jesus Dominguez Luis Committee member
  5. Cristina Risco Ortiz Committee member
Department:
  1. Medicina Física y Farmacología

Type: Thesis

Teseo: 318621 DIALNET

Abstract

Durante el desarrollo de esta Tesis Doctoral, hemos demostrado que la alteración de la dinámica de la membrana asociada a PIP2 y coordinada por la GTPasa Arf6, ya sea mediante la interferencia específica de la proteína Arf6 endógena o mediante la sobreexpresión de mutantes activos o inactivos del ciclo GTPasa de Arf6, unidos a GTP o GDP respectivamente, bloquea los primeros estadios de la infección de linfocitos T CD4+ por el VIH-1. Observamos que la sobreexpresión de los mutantes Arf6-Q67L y Arf6-T44N inducen la acumulación de estructuras asociadas a PIP2 en la membrana plasmática de células permisivas, como se visualizó mediante la utilización de una sonda de detección de PIP2, PH-ECFP. Este hecho es indicativo de la modificación del tráfico de membrana asociado a vesículas de PIP2 desde y hacia la superficie celular. Asimismo, la expresión de los mutantes Arf6-Q67L, Arf6-T44N, Arf6-T27N y Arf6-N48I/Q67L en células permisivas inhibe las primeras etapas de la infección viral, que indica que el ciclo GTPasa Arf6-GTP/GDP regula la fusión, entrada e infección eficiente del VIH-1. Por otro lado, hemos demostrado que la modificación del citoesqueleto de actina cortical por sobreexpresión de la proteína de unión y corte de F-actina gelsolina, afecta negativamente al agrupamiento de los receptores CD4-CXCR4 o CD4-CCR5 de manera dependiente de actina e inducido por la envuelta gp120 del VIH-1. Igualmente, la sobreexpresión de una construcción funcional de gelsolina, reduce el contenido de F-actina celular cortical disminuyendo la migración de células T en respuesta a un gradiente quimiotáctico mediado por la quimiocina SDF-1alfa, sin afectar a la endocitosis de CXCR4 inducido por ligando.