Caracterizacion estructura-funcion de la proteina rad9b en celulas humanas

  1. Antonio Jesus Perez Castro
Dirigée par:
  1. Eduardo Carlos Salido Ruiz Directeur
  2. Raimundo Freire Betancort Directeur/trice

Université de défendre: Universidad de La Laguna

Année de défendre: 2009

Département:
  1. Ciencias Médicas Básicas

Type: Thèses

Teseo: 283381 DIALNET

Résumé

Las lesiones en el ADN, como son las roturas de la cadena o las horquillas de replicación detenidas, causan inestabilidad genómica si no son reparadas. La célula dispone de mecanismos que reconocen estas lesiones, detienen el ciclo celular y promueven la reparación. La proteína Rad9A juega un papel importante en el checkpoint G2/M en respuesta a distintos agentes genotóxicos. Forma parte del complejo 9-1-1 (junto con Hus1 y Rad1), que es cargado en la región de la lesión por el complejo Rad17-RFC, y posibilita que TopBP1 active a la quinasa ATR. Rad9A ha sido ampliamente caracterizada. En este trabajo se ha estudiado la proteína Rad9B, parálogo de la anterior, en células humanas. Mediante inmunoprecipitación de Rad9B recombinante se observó que puede formar complejo con Rad1, Hus1 y Rad17, y también consigo misma a través de los dominios "tipo PCNA", datos que sugieren la existencia de un complejo 9-1-1 alternativo participado por Rad9B en sustitución de Rad9A, o la existencia de un multímero homomérico de Rad9B. Mediante cromatografía de exclusión molecular y fraccionamiento celular se demostró que Rad9B forma complejos de altísimo peso molecular in vivo y que tiene capacidad de unión con la cromatina. Por otra parte, la sobreexpresión de Rad9B recombinante es capaz de detener el ciclo celular en fase G1 en células U2OS, sin efecto alguno en otras fases del ciclo. Además, la expresión de Rad9B en células HeLa las sensibiliza a desencadenar la apoptosis en respuesta a una dosis de luz UV normalmente tolerada por estas células. Los nucléolos son dominios nucleares organizados por el acto de transcribir el ARNr y de ensamblar las unidades ribosomales. La inhibición de la trancripción dependiente del complejo ARN polimerasa I (causada por un tratamiento con luz UV o el agente Actinomycin D) provoca la desorganización de los nucléolos y la segregación de sus componentes. Rad9B responde frente a ello acumulándose en regiones discretas de los nucléolos desorganizados. Esta acumulación de Rad9B depende de las rutas de señalización de las quinasas ATR, p38 y JNK. Además, los tres dominios funcionales de Rad9B (los dos dominios tipo PCNA, y la cola Ct) son necesarios para esta respuesta. Esta información sugiere que Rad9B esté implicada en la respuesta lesiones que efecten a la progresión del complejo ARN polimerasa I.