Análisis genético de genes mayores de predisposición y genes de baja penetrancia en el cáncer colorrectal esporádico

Abstract

ÍNDICE ....................................................................................................................................... 9 RESUMEN ................................................................................................................................ 13 ABREVIATURAS ..................................................................................................................... 17 INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................... 23 1. EL CÁNCER ............................................................................................................. 23 2. EL CÁNCER COLORRECTAL ............................................................................... 26 2.1. INCIDENCIA Y MORTALIDAD ........................................................................ 26 2.2. ETIOLOGÍA ......................................................................................................... 29 2.3. DIAGNÓSTICO .................................................................................................... 30 2.4. LOCALIZACIÓN DE LOS TUMORES .............................................................. 30 2.5. CLASIFICACIÓN ................................................................................................. 32 2.5.1. CLASIFICACIÓN HISTOLÓGICA ..................................................................... 33 2.5.2. CLASIFICACIÓN CLINICOPATOLÓGICA ................................................ 34 2.6. VÍAS MOLECULARES DE LA TUMOROGÉNESIS COLORRECTAL .......... 36 2.6.1. VÍA SUPRESORA Y CIN .............................................................................. 36 2.6.2. VÍA MUTADORA Y MSI .............................................................................. 37 2.6.3. VÍA MUTADORA INTERMEDIA ................................................................ 40 2.6.4. VÍA SERRADA .............................................................................................. 41 2.7. SÍNDROMES DE CCR DESARROLLADOS A TRAVÉS DE LAS DISTINTAS VÍAS DE CARCINOGÉNESIS. ......................................................................................... 42 2.7.1. CCR ESPORÁDICO ....................................................................................... 42 2.7.2. CCR FAMILIAR ............................................................................................. 43 2.7.3. CCR HEREDITARIO ..................................................................................... 43 2.7.3.1. CCR HEREDITARIO POLIPÓSICO....................................................... 44 2.7.3.1.1. POLIPOSIS ADENOMATOSA ....................................................... 44 2.7.3.1.2. POLIPOSIS HAMARTOMATOSA ................................................. 45 2.7.3.2. CCR HEREDITARIO NO-POLIPÓSICO ............................................... 46 2.7.3.2.1. SÍNDROME DE LYNCH O HNPCC ............................................... 46 2.8. GENES IMPLICADOS EN LA TUMOROGÉNESIS COLORRECTAL ........... 53 2.8.1. VÍA SUPRESORA .......................................................................................... 53 2.8.1.1. APC ........................................................................................................... 53 2.8.1.2. CDH1 ........................................................................................................ 56 2.8.1.3. KRAS2 ....................................................................................................... 58 2.8.1.4. TP53 .......................................................................................................... 61 2.8.1.5. DCC .......................................................................................................... 63 2.8.2. VÍA MUTADORA .......................................................................................... 64 2.8.2.1. MUTADORES PRIMARIOS ................................................................... 64 2.8.2.2. MUTADORES SECUNDARIOS ............................................................. 72 2.8.2.2.1. BAX ................................................................................................... 72 2.8.2.2.2. TGFBR2 ............................................................................................ 74 2.8.3. METILACIÓN EN EL CÁNCER COLORRECTAL ..................................... 77 OBJETIVOS .............................................................................................................................. 83 Índice- 10 PACIENTES Y MÉTODOS ..................................................................................................... 87 1. PACIENTES Y CONTROLES .................................................................................. 87 2. EXTRACCIÓN DEL ADN GENÓMICO ................................................................. 88 3. ANÁLISIS DE LA INESTABILIDAD DE MICROSATÉLITES ............................ 90 4. ANÁLISIS DE LA PÉRDIDA DE HETEROCIGOSIDAD...................................... 90 5. ANÁLISIS DEL CODON 12 DEL GEN KRAS2 ...................................................... 93 6. ANÁLISIS DE LOS MUTADORES SECUNDARIOS ............................................ 97 7. PCR ESPECÍFICA DE METILACIÓN (MSP) ......................................................... 98 8. ANÁLISIS DE POLIMORFISMOS EN MLH1 ...................................................... 101 9. ANÁLISIS DENSITOMÉTRICO ........................................................................... 105 10. SECUENCIACIÓN ................................................................................................. 105 11. ANÁLISIS ESTADÍSTICO ..................................................................................... 106 RESULTADOS ........................................................................................................................ 109 1. ANÁLISIS DE LA INESTABILIDAD DE MICROSATÉLITES .......................... 109 2. ANÁLISIS DE LOS MUTADORES SECUNDARIOS .......................................... 115 3. ANÁLISIS DE LA METILACIÓN ......................................................................... 129 Gen MLH1 ......................................................................................................................... 130 Gen MSH2 ......................................................................................................................... 140 Gen P16 ............................................................................................................................. 150 Gen P15 ............................................................................................................................. 160 Gen CDH1 ......................................................................................................................... 161 FENOTIPO CIMP ............................................................................................................. 162 4. ANÁLISIS DE POLIMORFISMOS EN EL GEN MLH1 ....................................... 165